محصولات

فسفوریلاسیون پروتئین عملکردهای متنوع سلولی را تنظیم می کند و نقش کلیدی در رشد اولیه گیاهان دارد.برای تکمیل و گسترش تحقیقات قبلی در مورد فسفوریلاسیون پروتئین در نهال‌های آرابیدوپسیس، ما از یک رویکرد جایگزین استفاده کردیم که استخراج پروتئین را در شرایط غیر دناتوره‌ای با غنی‌سازی کروماتوگرافی میل ترکیبی یون فلزی (IMAC) از فسفوپروتئین‌های دست نخورده در عصاره‌های تخلیه شده از روبیسکو ترکیب می‌کند و به دنبال آن شناسایی می‌شود. با استفاده از الکتروفورز ژل دو بعدی (2-DE) و کروماتوگرافی مایع-طیف سنجی جرمی پشت سر هم (LC-MS/MS).هضم تریپسین درون ژل و تجزیه و تحلیل نقاط ژل انتخاب شده، 144 پپتید و بقایای فسفریله شده را شناسایی کرد که از این میان تنها 18 فسفوپپتید و 8 فسفوزیت در پایگاه‌های داده سایت فسفوریلاسیون PhosPhAt 4.0 و P3DB Arabidopsis thaliana یافت شد.بیش از نیمی از 82 فسفوپروتئین شناسایی شده در متابولیسم کربوهیدرات، فتوسنتز/تنفس یا پیامک مکانیکی پاسخ استرس اکسیداتیو دخیل بودند.غنی‌سازی فسفوپروتئین‌های دست‌نخورده قبل از 2-DE و LC-MS/MS به نظر می‌رسد در مقایسه با روش‌هایی که از غنی‌سازی در سطح پپتید استفاده می‌کنند، تشخیص ترئونین فسفریله و باقی‌مانده‌های تیروزین را افزایش می‌دهد، که نشان می‌دهد این دو رویکرد از نظر پوشش محل فسفریلاسیون تا حدودی مکمل یکدیگر هستند.مقایسه نتایج برای نهال‌های جوان با آن‌هایی که قبلاً برای برگ‌های بالغ آرابیدوپسیس به‌دست‌آمده بود، پنج پروتئین را شناسایی کرد که به طور متفاوت در این بافت‌ها فسفریله می‌شوند، که پتانسیل این تکنیک را برای بررسی پویایی فسفوریلاسیون پروتئین در طول رشد گیاه نشان می‌دهد.