محصولات

نحوه ترکیب اثرات جهش های همزمان برای تغییر فعالیت آنزیمی به راحتی قابل پیش بینی نیست زیرا این اثرات همیشه به صورت خطی افزایشی نیستند.از این رو، توصیف اثرات جهش‌های همزمان باقی مانده‌های اسید آمینه که به سوبسترا متصل می‌شوند، می‌تواند سهم قابل توجهی در درک ویژگی سوبسترای آنزیم‌ها داشته باشد.در بتا گلیکوزیداز از Spodoptera frugiperda (Sfbetagly)، هر دو باقیمانده Q39 و E451 با بستر تعامل دارند و این برای تعریف ویژگی سوبسترا ضروری است.جهش‌های دوگانه Sfbetagly (A451E39، S451E39 و S451N39) با جهش‌زایی جهت‌دهی به محل تهیه شدند، در باکتری بیان شدند و با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی خالص شدند.این آنزیم ها با استفاده از p-nitrophenyl β-galactoside و p-nitrophenyl β-fucoside به عنوان سوبسترا مشخص شدند.نسبت k cat/km برای جهش‌های منفرد و دوگانه Sfbetagly حاوی جهش‌های مکان‌دار در موقعیت‌های Q39 و E451 برای نشان دادن تأثیر بر انرژی آزاد خنجر ESdouble (کمپلکس حالت گذار آنزیم) جهش‌های دوگانه (Gdouble) استفاده شد. daggerxy) مجموع اثرات ناشی از جهش های منفرد (Gdouble daggerx و Gdouble daggery) نیست.این تفاوت در خنجر Gdouble نشان می دهد که اثرات تک جهش ها تا حدی همپوشانی دارند.بنابراین، این اثر مشترک فقط یک بار در Gdouble daggerxy به حساب می آید.داده‌های کریستالوگرافی روی بتا گلیکوزیدازها حضور یک پیوند هیدروژنی دوتایی شامل باقی مانده‌های Q39 و E451 و همان گروه هیدروکسیل بستر را نشان می‌دهند.بنابراین، داده‌های ترمودینامیکی و کریستالوگرافیک نشان می‌دهند که باقی‌مانده‌های Q39 و E451 تأثیر متقابلی بر تعاملات مربوطه خود با بستر دارند.