محصولات

روش جدید کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا برای گلیکوزیل ترانسفرازها بر اساس مشتق سازی با اسید آنترانیلیک و تشخیص فلورسانس.

سنجش‌ها با استفاده از شیمی برچسب‌گذاری منحصربه‌فرد اسید 2-آمینوبنزوئیک (2AA؛ اسید آنترانیلیک، AA) برای اندازه‌گیری فعالیت‌های هر دو گالاکتوزیل ترانسفراز β1-4 (GalT-1) و α2-6 سیالیل ترانسفراز (ST-6) توسط مایع با کارایی بالا ایجاد شدند. کروماتوگرافی (HPLC) با تشخیص فلورسانس (Anumula KR. 2006. پیشرفت در روش های مشتق سازی فلورسانس برای تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا کربوهیدرات های گلیکوپروتئین. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) و N-acetyllactosamine به عنوان گیرنده و uridine diphosphate (UDP)-galactose و cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) به عنوان اهداکننده برای GalT-1 و ST-6، به ترتیب استفاده شد.محصولات آنزیمی در محل با AA برچسب‌گذاری شدند و با استفاده از شرایط فاز نرمال از زیرلایه‌ها روی ستون TSKgel Amide 80 جدا شدند.واحدهای آنزیمی از مناطق اوج با مقایسه با استانداردهای مشتق شده همزمان Gal-β1-4GlcNAc و NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc تعیین شد.خطی (زمان و غلظت آنزیم)، دقت (درون و بین سنجش) و تکرارپذیری برای سنجش ایجاد شد.مشخص شد که سنجش‌ها در نظارت بر فعالیت آنزیم در طول جداسازی و خالص‌سازی مفید هستند.سنجش‌ها بسیار حساس بودند و برابر یا بهتر از اندازه‌گیری‌های سنتی مبتنی بر قند رادیواکتیو انجام شدند.فرمت سنجش همچنین می تواند برای اندازه گیری فعالیت سایر ترانسفرازها استفاده شود، مشروط بر اینکه گیرنده های کربوهیدرات دارای انتهای کاهنده برای برچسب گذاری باشند.سنجشی برای پذیرندگان گلیکوپروتئین با استفاده از IgG ایجاد شد.یک روش پروفیل HPLC کوتاه برای جداسازی گلیکان‌های IgG (G0، G1، G2، تک و دی‌سیلیله دوتایی)، که تعیین فعالیت‌های GalT-1 و ST-6 را به شیوه‌ای سریع تسهیل می‌کند، توسعه داده شد.علاوه بر این، این روش پروفایل باید برای نظارت بر تغییرات گلیکان IgG در تنظیمات بالینی مفید باشد.