محصولات

سلول‌های یوکاریوتی حاوی تعادل ظریفی از چهار دئوکسی ریبونوکلئوزید تری فسفات (dNTPs) هستند که تنها برای چند دقیقه تکثیر DNA کافی است.هم کمبود و هم مازاد یک dNTP ممکن است منجر به افزایش نرخ جهش، تعمیر DNA معیوب یا تخلیه DNA میتوکندری شود.dNTP ها معمولاً توسط یک سنجش آنزیمی تعیین می شوند که در آن ادغام dATP رادیواکتیو (یا dTTP رادیواکتیو در سنجش dATP) به الیگونوکلئوتیدهای مصنوعی خاص توسط یک DNA پلیمراز متناسب با غلظت dNTP ناشناخته است.ما متوجه شدیم که DNA پلیمراز معمولی استفاده می شود ممکن است ریبونوکلئوتید مربوطه را جایگزین dNTP ناشناخته کند که در برخی موارد منجر به تخمین بیش از حد dNTP ها می شود.اکنون شرایط سنجش را برای هر dNTP توصیف می کنیم که از ادغام ریبونوکلئوتید جلوگیری می کند.برای سنجش dTTP و dATP، به حداقل رساندن غلظت آنزیم Klenow و dATP نشاندار (یا dTTP) کافی است.برای dCTP و dGTP ما مجبور شدیم آنزیم Klenow را با Taq DNA پلیمراز یا Thermo Sequenase جایگزین کنیم.ما پیشنهاد می‌کنیم که در برخی از گزارش‌های قبلی، ادغام ریبونوکلئوتید ممکن است باعث مقادیر بسیار بالایی برای dGTP و dCTP شده باشد.