محصولات

توپولوژی غشاء دامنه کانال کولیسین E1 با انتقال انرژی تشدید فلورسانس (FRET) مورد مطالعه قرار گرفت.FRET شامل یک اسید آمینه فلورسنت کدگذاری شده ژنتیکی (کومارین) به عنوان دهنده و یک باقی مانده سیستئین انتخابی نشاندار شده با DABMI (4-(dimethylamino)phenylazophenyl-4'-maleimide) به عنوان گیرنده FRET بود.باقیمانده کومارین فلورسنت از طریق یک جفت سنتتاز tRNA/aminoacyl-tRNA متعامد به پروتئین وارد شد که امکان ادغام انتخابی را به هر سایتی در حوزه کانال کولیسین فراهم می‌کرد.هر گونه دارای یک جهش توقف (TAG) برای ادغام کومارین و یک جهش سیستئین (TGT) برای اتصال DABMI بود.شش فاصله بین مارپیچی در مارپیچ 1-6 با استفاده از تجزیه و تحلیل FRET برای هر دو حالت محلول و محدود به غشاء تعیین شد.داده‌های FRET تغییرات زیادی را در فواصل بین مارپیچی در بین مارپیچ‌های 3-6 بر اساس ارتباط غشایی نشان داد که بینش جدیدی در مورد ساختار محدود به غشاء دامنه کانال ارائه می‌کند.به طور کلی، بازده بین مارپیچی کومارین-DABMI FRET با اتصال غشا کاهش یافت و بر اساس مدل چتر برای کانال کولیسین ایجاد شد.یک مدل آزمایشی برای وضعیت بسته دامنه کانال بر اساس داده‌های FRET فعلی و قبلا منتشر شده توسعه داده شد.این مدل آرایش دایره‌ای مارپیچ‌های 1-7 را در جهت عقربه‌های ساعت از سمت خارج سلولی و ارتباط سطحی غشایی مارپیچ‌های 1، 6، 7 و 10 در اطراف سنجاق سر گذرنده مرکزی که توسط مارپیچ‌های 8 و 9 تشکیل شده است، پیشنهاد می‌کند.