محصولات

پروتئین ORF45 ویروس هرپس مرتبط با سارکوم کاپوزی (KSHV) یک پروتئین گاما هرپس خاص فوری و زودرس است.مطالعات قبلی ما نقش حیاتی آن را در مراحل اولیه و اواخر عفونت KSHV نشان داده است.در این مطالعه، ما تعامل ORF45 را با استفاده از پانل آنتی‌بادی‌های مونوکلونال بررسی کردیم.علاوه بر پروتئین‌های کیناز تنظیم‌شده خارج سلولی (ERK) و P90 ریبوزومی S6 کیناز (RSK) که قبلاً شناسایی شده‌اند، چندین پروتئین دیگر هم خالص پیدا کردیم، از جمله پروتئین‌های برجسته 38 کیلو دالتون و 130 کیلو دالتون.طیف سنجی جرمی نشان داد که پروتئین 38 کیلو دالتونی ORF33 ویروسی و پروتئین 130 کیلو دالتونی USP7 سلولی (پروتئاز اختصاصی یوبیکوئیتین 7) است.ما دامنه اتصال ORF33 را به 19 اسید آمینه کربوکسیل ترمینال بسیار حفاظت شده (aa) ORF45 و دامنه اتصال USP7 را به موتیف اجماع گزارش شده در منطقه مرکزی ORF45 نگاشت کردیم.با استفاده از رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس، ما colocalization ORF45 با ORF33 یا USP7 هر دو تحت شرایط ترانسفکت شده و در سلول های آلوده به KSHV مشاهده کردیم.علاوه بر این، ما متوجه تغییر محل وابسته به ORF45 از بخشی از ORF33/USP7 از هسته به سیتوپلاسم شدیم.ما دریافتیم که ORF45 باعث افزایش تجمع پروتئین ORF33 می شود که اگر دامنه اتصال ORF33- یا USP7 در ORF45 حذف شود، لغو شد.علاوه بر این، حذف پایانه کربوکسیل حفاظت شده ORF45 در ژنوم KSHV به شدت سطح پروتئین ORF33 را در سلول های آلوده به KSHV کاهش داد و تولید ویریون های نتاج را لغو کرد.در مجموع، نتایج ما نه تنها اجزای جدید اینتراکتوم ORF45 را نشان می‌دهد، بلکه نشان می‌دهد که برهم‌کنش‌های بین این پروتئین‌ها برای تکثیر لیتیک KSHV بسیار مهم است. ویروس هرپس مرتبط با سارکوم کاپوزی (KSHV) عامل ایجاد چندین سرطان انسانی است.KSHV ORF45 یک پروتئین چند منظوره است که برای تکثیر لیتیک KSHV مورد نیاز است، اما مکانیسم های دقیقی که ORF45 توسط آن عملکردهای حیاتی خود را انجام می دهد نامشخص است.مطالعات قبلی ما نشان داد که تمام پروتئین ORF45 در سلول‌ها در کمپلکس‌های با وزن مولکولی بالا وجود دارد.بنابراین ما به دنبال توصیف متقابل ORF45 برای ارائه بینشی در مورد نقش آن در طول تکرار لیتیک بودیم.با استفاده از پانلی از آنتی بادی های مونوکلونال، اینتراکتوم ORF45 را در سلول های آلوده به KSHV بررسی کردیم.ما دو شریک اتصال جدید ORF45 را شناسایی کردیم: پروتئین ویروسی ORF33 و پروتئاز اختصاصی یوبیکوئیتین سلولی 7 (USP7).ما همچنین نشان می‌دهیم که تعامل بین ORF45 و ORF33 برای تولید کارآمد ذرات ویروسی KSHV بسیار مهم است، و نشان می‌دهد که تداخل هدفمند با این تعامل ممکن است یک استراتژی جدید برای مهار تکثیر لیتیک KSHV باشد.