محصولات

برای تعیین کمیت چند متابولیت 5-فلوئورواوراسیل (5-FU) و دو نوکلئوتید مونوفسفات درون زا، ما یک روش اصلی را بر اساس طیف سنجی جرمی کروماتوگرافی مایع- پشت سر هم (LC-MS/MS) توسعه دادیم.این سنجش امکان تعیین موارد زیر را فراهم کرد: (1) تولید داخل سلولی 5-فلوئورو-2'-دئوکسی‌اوریدین-5'-مونوفسفات (5-FdUMP) از 5-FU یا 5-فلورو-2'-دئوکسی‌اوریدین (5-FdUrd) ، (ب) تأثیر غلظت 5-FdUMP بر نسبت 2'-دئوکسی اوریدین-5'-مونوفسفات داخل سلولی (dUMP) / تیمیدین-5'-مونوفسفات (TMP) و (iii) میزان ترشح 5-FdUMP و 5-FU از سلول های کشت شده انسانی توسط انتقال دهنده های ABC.تحت شرایط تجربی ما، سلول‌ها با 5-FU یا 5-FUrd انکوبه شدند.سپس پروتئین های سلولی توسط متانول رسوب داده شدند.این روش بازیابی استخراج بالایی را فراهم کرد.علاوه بر این، برای اندازه‌گیری ترشح 5-FU و 5-FdUMP از سلول‌ها، کمی کردن این مولکول‌ها را در محیط کشت انجام دادیم.محیط‌ها یا مستقیماً تزریق شدند (5-FU) یا تحت استخراج فاز جامد با استفاده از کارتریج استخراج Oasis Wax (5-FdUMP) قرار گرفتند.جداسازی آنالیت ها بر روی ستون dC18 آتلانتیس 3.5 میکرومتر، (100 میلی متر × 2.1 میلی متر ID) با حالت ایزوکراتیک با استفاده از بافر فرمت آمونیوم / متانول / آب (5/5/90، V/V) به عنوان فاز متحرک انجام شد.زمان اجرا بیش از 6.2 دقیقه نبود.آنالیت ها در یک رابط الکترواسپری تحت حالت یون منفی یونیزه شدند.ما این روش را در محدوده 2.5-150 نانوگرم در میلی لیتر-1 با توجه به ترکیبات تأیید کردیم.تنوع درون و بین آزمون در طول هفت روز کمتر از 10٪ بود.همه ترکیبات در سلول ها یا در محیط کشت زمانی که نمونه ها در دمای 20- درجه سانتی گراد به مدت حداقل دو هفته و پس از سه چرخه انجماد و ذوب نگهداری شدند، پایدار بودند.هیچ اثر ماتریسی در هر دو محیط مشاهده نشد.